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一氧化氮合酶染色液由磷酸盐缓冲、漂洗、孵育、复染等步骤，可用于组织冰冻切片染色，尤其适用于脑组织冰冻切片染色，亦可用于细胞爬片、细胞涂片染色。

细胞中的左旋精氨酸和氧在一氧化氮合酶(Nitxic oxide synthase，NOS)的作用下生成一氧化氮和瓜氨酸。还原型辅酶Ⅱ(NADPH)是一氧化氮合酶的辅酶，可将底物脱氢，然后将氢传递给硝基四氮唑蓝(NBT)，NBT会被还原成蓝黑色沉淀，该沉淀部位即为NADPH所在部位即NOS部位。

• 应选择恰当的固定液、固定方法、固定时间，否则会影响酶的活性。
  
• 中性红复染可以更好的显示细胞轮廓，有助于进一步计数阳性细胞率。
  
• 组织切片染色时可见NOS神经元，类似于Golgi银染，胞体、神经纤维、纤维末梢均可着色。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• 脑组织冰冻切片
  
  • 动物常规灌注固定，取取脑组织，浸入30%蔗糖溶液，行冰冻切片厚度40μm。
    
  • 入Tissue PB Buffer漂洗10min，重复1次。
    
  • 用蒸馏水稀释Wash Buffer(6×)至1×，切片入1×Wash buffer，室温孵育60min。
    
  • 入NOS孵育液并放入湿盒中，37℃避光孵育3h。
    
  • 用蒸馏水稀释Wash Buffer(6×)至3×，切片入3×Wash Buffer，4℃孵育过夜。
    
  • 入Tissue PB Buffer，漂洗10min，重复1次。
    
  • 裱片、晾干。
    
  • 可选：入中性红染色液复染1～2min。
    
  • 常规脱水、透明、封片、镜检。
• 细胞爬片
  
  • 细胞爬片或甩片用Cell PB Buffer漂洗5min，重复1次。
    
  • 4%多聚甲醛室温固定30min。
    
  • 入Cell PB Buffer漂洗10min，重复1次。
    
  • 用蒸馏水稀释Wash Buffer(6×)至1×，切片入1×Wash buffer，室温孵育60min。
    
  • 入NOS孵育液并放入湿盒中，37℃避光孵育3h。
    
  • 用蒸馏水稀释Wash Buffer(6×)至3×，切片入3×Wash Buffer，4℃孵育过夜。
    
  • 按上述脑组织冰冻切片步骤3～5操作。
    
  • 入Cell PB Buffer漂洗10min，重复1次。
    
  • 可选：入中性红染色液复染1～2min。
    
  • 封片，镜检。